①收集細胞，加入適量的預冷的PBS洗滌細胞，然后棄去洗液，重復上述步驟三次。收集細胞沉淀放置于冰上。

　　②向細胞沉淀種加入含有PMSF的100 μl裂解液，在冰上的裂解30分鐘。在裂解過程中，要定期輕輕彈動以確保細胞充分裂解。

　　③收集裂解液到1.5 ml 離心管中，在4℃下進行12000 rpm離心5分鐘。

　　④將離心后的上清分裝至0.5 ml 離心管中，將樣品于沸水中煮5 min使蛋白變性，迅速轉移到-20℃保存。