外泌體是細(xì)胞外囊泡的一種,其膜來源與粒徑范圍與細(xì)胞外囊泡相似,電鏡下,顯示出典型的茶托狀超微結(jié)構(gòu)。外泌體主要使用超速離心法、過濾離心法、密度梯度離心法、免疫磁珠法、幾種方法進(jìn)行提取。根據(jù)外泌體的大小和密度,用不同的離心速度,達(dá)到分離出外泌體的超速(差速)離心法,是學(xué)術(shù)上用的比較多且較認(rèn)可的外泌體的提取方法,被認(rèn)為是外泌體提取的黃金方法。
一般樣品量:血清/血漿6ml、細(xì)胞上清40ml,干冰運(yùn)輸,注意:分離exosome前的樣品不能加入任何RNA保護(hù)劑。
外泌體提取后,后續(xù)可進(jìn)行電鏡、NTA相關(guān)測試服務(wù)。若后續(xù)不需要做其他實(shí)驗(yàn),提取的外泌體干冰運(yùn)輸回寄。
一般需要提供多少細(xì)胞培養(yǎng)液提取外泌體?
培樣液提供量取決于細(xì)胞系。有些細(xì)胞系外泌體釋放量高,幾毫升即可;有些釋放量低,需要上百毫升。一般來說一個(gè)普通的細(xì)胞系,用超離分離外泌體,第一次摸索條件,起始培液量z好50ml以上。