Tunel染色 TUNEL凋亡染色作用原理為染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標記到DNA的3'-末端，從而可進行凋亡細胞的檢測。適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍切片）和細胞樣本在單細胞水平上的凋亡原位檢測、抗腫瘤藥的藥效評價。
細胞-Tunel染色送樣要求：
客戶可根據(jù)實驗需要選擇增值服務，如細胞培養(yǎng)、樣品處理等。
Tunel染色+熒光拍照標本要求：
1. 對于貼壁細胞或細胞涂片，PBS洗滌3次，用4%多聚甲醛固定細胞30-60分鐘，低溫寄送（冰袋郵寄，防止結(jié)冰）；
2. 對于懸浮細胞或細胞懸液，收集細胞(不超過200萬細胞)，PBS洗滌3次，用4%多聚甲醛固定細胞30-60分鐘，為防止細胞聚集成團，宜在側(cè)擺搖床或水平搖床上緩慢搖動的同時進行固定。
熒光信號弱或沒有熒光信號
原因1：樣本處理不當
（1）樣本切片太厚。建議適當將切片切薄一點，便于染色。
（2）脫蠟和水化不充分。建議脫蠟先60 oC 20 min，再使用二甲苯兩次5-10 min；而水化用梯度乙醇從高到低濃度浸洗。
（3）Proteinase K的孵育時間過短。優(yōu)化Proteinase K的孵育時間，常用時間10-30 min。4 μm左右的片子孵育10 min，30μm左右的片子孵育30 min。
（4）Proteinase K濃度過低。建議蛋白酶K一般工作液濃度為20 μg/mL。
（5）放置在-20 oC保存較長時間的切片不新鮮，減低染色效率。建議使用新鮮切片。
原因2：染色操作不當
（1）染色時間過短。建議一般 37 oC 孵育60 min，可以根據(jù)凋亡損傷程度，可長至2 h，但要結(jié)合背景著色。
（2）TdT酶或熒光素/酶標記的dUTP濃度過低。建議適當提高TdT酶或熒光素/酶標記的dUTP濃度。
（3）TdT酶失活。建議TUNEL反應液臨用前配制，短時間在冰上保存。不宜長期保存，長期保存會導致TdT酶失活。
（4）樣本干燥。加上TUNEL反應液后，請蓋上蓋玻片/保鮮膜/濕盒中進行，保證樣本均勻染色，又可防止反應液干燥。
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儀器型號
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