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①取少量組織塊,使用清潔的剪刀將組織塊徹底剪碎。
②向勻漿器中加入500 ul含有PMSF的裂解液,進行勻漿。隨后將勻漿器置于冰上。
③5-10分鐘后,再次進行碾磨,然后再次放置于冰上。這個過程需要重復幾次,以確保組織塊充分碾碎。
④裂解30分鐘后,使用移液器將裂解液轉移至1.5 ml 離心管中。隨后,在4℃下進行12000 rpm離心5分鐘,將上清液分裝至0.5 ml 離心管中,將樣品于沸水中煮5 min使蛋白變性,并存放于-20℃。
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