1、簡介:
SDS-PAGE膠的染色可用于初步評估某樣品中蛋白的表達情況,考馬斯亮藍染色有G250和R250兩種,在酸性條件下,R250和G250可與蛋白質中的精氨酸、賴氨酸和組氨酸(arginine, lysine and histidine)結合;R250與蛋白結合后呈紅色-粉紅色,G250與蛋白結合呈綠-藍色。考馬斯亮藍染色具有容易檢測、高靈敏度(可檢測低至0.5ug/cm2的蛋白)和可逆性染色等特點。
在Western Blot中常對SDS-PAGE進行考馬斯亮藍染色,在電泳結束后進行考馬斯亮藍染色可根據SDS-PAGE膠上條帶位置、形狀及條帶間的間距等推斷蛋白分離情況,從而評估電泳條件是否得當及SDS-PAGE制備情況。
2、服務流程:
細胞樣品,提供1*106個細胞;菌體樣品,離心后綠豆大小;組織樣品,0.1g新鮮組織。注:蛋白樣品均需干冰寄送。
1、條帶不清晰的原因是什么?
條帶不清晰可能是因為樣品中目的蛋白含量較少,可提高樣品濃度或增加上樣量;
2、背景較深的原因是什么?
背景較深可能是由于染色時間較長,考馬斯亮藍未洗干凈,可增加脫色時間,避免染色時間過長。