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顯微成像平臺

生物透射電鏡(生物TEM)

儀器型號

Hitachi Regulus8100,Sigma 300;Zeiss Gemini 300; Hitachi S4800;JSM-7800F;蔡司 Supra 55等

預約次數:20369
新客專享:首單立減200元
測試收費:溝通
詳細介紹
 
項目介紹
 
生物透射電鏡是觀察生物細胞樣品內部形態的重要工具,其電壓在80-120kv可以降低生物樣品因高能電子束輻射而損傷的影響,同時依賴于生物樣品制備技術的發展,如超薄切片技術、負染色技術、冷凍制樣技術、細胞化學技術等,廣泛應用于組織學、細胞學、病毒學、病理學及材料學等多個學科的研究中。一般用來觀察細胞整體結構、細胞膜、細胞壁、細胞器等亞顯微結構變化、材料進入細胞內部的分布情況或者細胞應付外界刺激產生的自噬小體等結構,以及外界生物入侵的侵染結構等。
 
樣本要求
 
1. 送樣要求
(1)細胞樣品用1.5ml的尖底管,離心成團(至少黃豆大?。?,加入2.5%戊二醛固定液(緩慢加入電鏡固定液,不要將細胞吹散。若將細胞吹散,請離心3000轉,保持細胞成團狀)。固定液加滿離心管,使樣品完全浸沒在固定液中,放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結冰。 (細菌樣品要求同細胞)
(2)組織樣本:腸、血管、皮膚、肌肉等有方向性樣本需切成1mm*3mm*0.5mm長方體小塊(如下圖B),要觀察的面為橫切面(1mm*0.5mm),使用2mL離心管加滿2.5%戊二醛固定液;無方向性的組織,如肝臟、腎臟、肺臟等可切成1mm3立方體小塊(如下圖A),使用2mL離心管加滿2.5%戊二醛固定液,放置于4°C固定12h后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸。注意:樣本管與冰袋隔開,避免固定液結冰。固定液滲透能力有限,超出此范圍后組織會無法完全固定,后續實驗無法完成,請務必重視此過程。 特別注意:取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質;觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。
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(3)植物樣本:取材流程:PBS沖洗樣品,確保無泥沙等污染物。然后用鋒利刀片或剪刀將樣品切成合適大小,裝入預冷的植物及細菌電鏡專用2.5%戊二醛中。不需要定位的樣品切成1立方毫米大?。ㄈ缛~片、果實、花粉等),需要定位的樣品,切1mm×3mm×0.5mm的長條狀(莖、根、表皮等)隨后抽氣,讓組織能沉淀到管底。充分固定后,用泡沫盒加冰袋低溫保存運輸,注意:樣本管與冰袋隔開,固定液切勿冷凍結冰。
(4)打印填寫完整的實驗預約單和樣品一起寄送;
(5)無法承接磁性樣本,敬請諒解。
2.測試周期 一般為樣品接收后的2-3周左右,如遇法定假期需要順延,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認,謝謝!
3.交付數據 每樣提供10張拍攝圖片(不提供分析服務)。如需更多照片請提前與工作人員溝通確認,并且會產生額外費用,請悉知!結果反饋請在測試完成一周內,不建議回收樣品,可回收制備好的包埋快和銅網,如有需要請提前反饋給e測試工作人員。
 
結果展示
 
參考圖
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常見問題
 
question
1、植物的根部為什么有時看不到細胞核?
植物細胞的細胞核相對比較小,不好切,切片的時候有可能沒有切到,所以在觀察透射電鏡的時候會發現看不到細胞核。
question
2、2.5%戊二醛固定液如何配置?
市售25%戊二醛水溶液                 10ml
0.1mol/L二甲砷酸鈉                    50ml
蒸餾水加至                                  100ml
question
3、切片染色的目的是什么?
 由于生物樣品主要由碳、氫、氧、氮等輕元素組成。這些元素原子對電子的散射能力很弱,相互之間的差別也很小。尤其生物超薄切片被樹脂所包埋,這些包埋樹脂對電子的散射能力與樣品本身差別很小。因此生物樣品超薄切片觀察時像的反差極弱。為了提高圖像的反差,要對超薄切片進行電子染色。這里所謂電子染色是根本不同于光學顯微鏡的染色,它是利用重金屬鹽(如鉛鹽、鈾鹽等)與細胞的某些成分或結構結合,由于重金屬對電子散射能力很強,使那些與其結合的結構或成分對電子散射能力增強,從而達到提高樣品本身反差。目前常用的染色劑是醋酸鈾和檸檬酸鉛染色液。
question
4、負染色背景雜亂可能是什么原因導致的
樣品中有其它的雜質(如雜蛋白,酶,糖,甚至前期處理留下的鹽(PPS))都有可能造成背景比較臟亂,或染液在干燥時分布不均勻導致,這些都是在負染時的正?,F象。
question
5、負染色的樣本用哪種染料比較好?
磷鎢酸對病毒的染色效果比較好;醋酸鈾(乙酸雙氧鈾)常用于蛋白質的染色,對一些病毒樣品負染色效果也較好,但由于醋酸鈾pH(4.5)比較低,不適于在該pH(4.5)下不穩定的蛋白質染色,同時醋酸鈾與磷酸鹽易形成結晶,因此可能影響染色效果,可以多清洗幾次。
question
6、生物電鏡樣本的取樣建議?
取材是電鏡實驗的第一步,其操作成功與否直接關系到電鏡結果的效果及成敗。為了得到好的結果,請務必按要求做好取材!取材基本要點:快(1min)、冷(4℃)、?。? mm3)、凈(無雜質)、準(部位準確)。不同的樣品,取材細節上有很大區別!取材部位準確,且注意觀察組織的方向性和定位。動作輕巧,器械鋒利,避免對組織的擠壓和推拉,建議用鋒利的手術刀片、手術剪刀。
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