圓二色光譜儀通過測量生物大分子的圓二色光譜從而得到生物大分子的二級結構。主要應用于蛋白質折疊、蛋白質構像研究、DNA/RNA反應,酶動力學,光學活性物質純度測量,藥物定量分析。
液體類:
(1)測試時需要空白溶劑做對照扣背景,麻煩樣品及溶劑至少各備5ml;
(2)樣品及溶劑的濃度對測試影響較大,不宜過高或過低(濃度過高,會超電壓,數據不準;濃度過低,沒有信號):不同物質,z佳濃度不同,測試時不對濃度進行摸索
A:如之前測過 CD 或有相關文獻,建議按對應濃度準備;
B:如沒測過 CD 或無文獻,但掃過紫外全譜,建議優選紫外濃度的一半配制樣品,如不合適再調整(直接用紫外對應濃度,測 CD 的話濃度偏高);
C:如以上均無,建議按0.5mg/ ml 來配(蛋白質樣品,濃度一般0.1-0.5mg/ ml ),但無法保證該濃度合適。
(3)DMSO和一些離子液體在低波長段會有吸收,導致CD數據不準,影響二級結構計算
固體類:
(1)粉末至少30mg;
(2)薄膜樣本直徑大于1cm;
(3)塊體大小1cm*1cm。
注意:有時效性的樣本,需要低溫保存的樣本,寄送時請用冰袋或者干冰郵寄,防止樣品寄樣時發生變質,影響測試結果。
1、csv和pdf格式,csv格式文件可以用Excel打開,origin軟件編輯
2、jws和txt格式文件,txt格式文件可以打開導入excle,origin等軟件編輯
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1、圓二色譜可以用來測試分析蛋白構象嗎
是可以的,這種一般測試波長范圍在190-260nm之間
2、蛋白溶液里含有手性物質,對圓二色譜測試有影響嗎?
可以測蛋白的二級結構,但是溶液中手性物質(如透明質酸等)的含量一定要很低,如果含量過高,手性物質也是有吸收和CT信號。如果想要蛋白的準確測量值,就需要同等濃度的手性物質來作為背景扣除,手性物質濃度一般以測紫外為準,要求紫外190nm-260nm信號吸收不能超過2