氨基酸，是含有堿性氨基和酸性羧基的有機(jī)化合物。羧酸碳原子上的氫原子被氨基取代后形成的化合物。動(dòng)物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，尿液中氨基酸的變化能反映肝、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反映灼傷、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對(duì)研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時(shí)期氮代謝變化、植物對(duì)氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。

 

氨基酸分析儀測定氨基酸含量
氨基酸分析儀是一種基于液相色譜法（LC）或液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）的精密儀器，用于快速準(zhǔn)確地測定樣品中氨基酸的種類和含量。這種方法在食品科學(xué)、生物化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)及環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。
液相色譜法（LC）測定氨基酸含量
● 實(shí)驗(yàn)原理：
液相色譜法通常結(jié)合離子交換柱分離和柱后茚三酮衍生化技術(shù)進(jìn)行氨基酸的定量檢測。樣品中的蛋白質(zhì)首先經(jīng)過酸水解，釋放出游離氨基酸，然后通過陽離子交換柱實(shí)現(xiàn)氨基酸的分離。各氨基酸按照它們與離子交換樹脂的親和力差異依次洗脫出來，隨后與茚三酮反應(yīng)生成有色物質(zhì)，z后在紫外分光光度計(jì)或熒光檢測器上測定吸光度或熒光強(qiáng)度，從而計(jì)算出每種氨基酸的含量。
● 操作步驟：
1. 樣品處理：將待測樣品進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理，包括蛋白質(zhì)的完全水解以及可能的凈化步驟。
2. 樣品注入：制備好的樣品溶液被注入到氨基酸分析儀的進(jìn)樣口。
3. 色譜分離：氨基酸在特定的離子交換柱上依據(jù)電荷和大小的不同得到分離。
4. 茚三酮衍生化：從色譜柱流出的氨基酸立即進(jìn)入衍生化反應(yīng)系統(tǒng)，與茚三酮試劑發(fā)生反應(yīng)形成有顏色的衍生產(chǎn)物。
5. 檢測與定量：生成的衍生物通過檢測器（如紫外吸收檢測器），測量其吸光度并轉(zhuǎn)化為濃度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算氨基酸的精確含量。
液質(zhì)聯(lián)用法（LC-MS）測定氨基酸含量
● 實(shí)驗(yàn)原理：
液質(zhì)聯(lián)用法利用高效液相色譜對(duì)氨基酸進(jìn)行初步分離，之后經(jīng)接口傳輸至質(zhì)譜儀進(jìn)行定性和定量分析。每個(gè)氨基酸具有獨(dú)特的質(zhì)荷比（m/z），通過檢測離子的質(zhì)量和強(qiáng)度可以準(zhǔn)確識(shí)別和定量樣品中的氨基酸組成。
● 操作步驟：
1. 樣品提取與預(yù)處理：同樣需要先將樣品中的蛋白質(zhì)水解為游離氨基酸，然后進(jìn)行必要的純化和濃縮。
2. 液相色譜分離：氨基酸混合物通過液相色譜柱進(jìn)行高分辨率分離。
3. 質(zhì)譜檢測：分離后的氨基酸組分逐一進(jìn)入質(zhì)譜儀，通過電噴霧電離（ESI）或其他離子化方式轉(zhuǎn)化為氣態(tài)離子。
4. 數(shù)據(jù)采集與分析：質(zhì)譜儀記錄下各氨基酸離子的質(zhì)譜圖，通過對(duì)比數(shù)據(jù)庫信息或標(biāo)準(zhǔn)品譜圖來鑒定氨基酸，并根據(jù)離子峰強(qiáng)度定量氨基酸含量。

 

樣本量：粉末非純樣品一般提供2g左右，溶液樣品提供5-10ml（蛋白的大于1mg/mL）。特別注意：氨基酸測試分游離氨基酸和水解氨基酸，需要在測試之前確定好測試內(nèi)容！ 交付內(nèi)容:：提供測試譜圖及氨基酸濃度數(shù)據(jù)。 實(shí)驗(yàn)周期：收到樣品后1-2周左右時(shí)間，具體實(shí)驗(yàn)周期請(qǐng)預(yù)約前與e測試工作人員溝通確認(rèn)。

 

采用氨基酸分析儀或者高效液相色譜測17種氨基酸（天門冬氨酸，蘇氨酸，絲氨酸，谷氨酸，脯氨酸，甘氨酸，丙氨酸，胱氨酸，纈氨酸，蛋氨酸，異亮氨酸，亮氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，賴氨酸，組氨酸，精氨酸）