飼料中的氨基酸含量測定對于評估飼料營養價值、優化動物營養配方以及確保動物健康生長至關重要。氨基酸分析通常包括樣品前處理和具體的檢測方法兩大部分。以下是常用的幾種測定飼料中氨基酸含量的方法及其基本步驟：

　　樣品前處理

　　水解：酸水解：這是常用的方法之一，適用于大多數氨基酸的測定。將飼料樣品與6N HCl混合，在真空條件下密封，并在110℃下加熱24小時。這種方法可以將蛋白質完全水解為自由氨基酸，但色氨酸會被破壞。

　　堿水解：專門用于測定色氨酸，因為色氨酸在酸性條件下不穩定。使用4M NaOH進行水解，通常需要更長的時間(如16-24小時)。

　　酶水解：某些情況下也可采用特定酶來水解蛋白質，這種方法對環境更加溫和，能夠保留更多敏感氨基酸。

　　中和與過濾：水解完成后，需中和溶液至中性，并通過濾膜過濾去除不溶物質，準備上機分析。

　　測定方法

　　1. 高效液相色譜法(HPLC)

　　原理：利用高效液相色譜系統分離不同種類的氨基酸，隨后通過柱后衍生化或柱前衍生化技術使氨基酸可視化。

　　操作流程：

　　柱前衍生化：將氨基酸先與熒光標記物(如OPA、FMOC等)反應生成具有熒光特性的衍生物，然后進樣分析。

　　柱后衍生化：直接注入氨基酸混合物到HPLC系統中，通過在線衍生化裝置生成可檢測的產物。

　　優點：高靈敏度、良好的分辨率及準確性，適合復雜基質中的氨基酸定量分析。

　　2. 離子交換色譜法(IEC)

　　原理：基于氨基酸帶電性質的不同，在離子交換樹脂上的保留行為差異實現分離。

　　操作流程：樣品經過預處理后進入離子交換柱，根據不同的pH梯度洗脫出各種氨基酸，再結合茚三酮顯色反應進行檢測。

　　優點：經典且可靠的方法，特別適合于大規模樣品分析。

　　3. 毛細管電泳法(CE)

　　原理：利用毛細管內的電場驅動氨基酸移動，依據其電荷和分子大小實現分離。

　　操作流程：樣品溶解后注入毛細管，施加電壓使各組分按順序到達檢測器。

　　優點：快速、消耗樣品少，適合微量樣品分析。

　　4. 分光光度法

　　原理：利用氨基酸與特定試劑發生化學反應形成有色化合物，通過測量吸光度來進行定量分析。

　　常見方法：例如茚三酮法，適用于總氨基酸含量的粗略估計;但該方法選擇性較差，難以區分具體種類的氨基酸。

　　數據分析與質量控制

　　標準曲線構建：使用已知濃度的標準氨基酸溶液建立校準曲線，用于計算未知樣品中氨基酸的濃度。

　　重復性和再現性檢查：確保實驗條件一致，定期校準儀器，以提高結果的準確性和可靠性。

　　空白對照：設立不含氨基酸的空白樣本作為對照，排除背景干擾。