一、項目介紹

　　體外條件下，用于測定抗菌藥物或材料體外抑制細菌生長效力的試驗稱為抑菌試驗。通過抑菌試驗，可以測定一個藥物或材料的z低抑菌濃度，用以評價該藥物或材料的抑菌性能，這是抗菌藥物的基本的藥效學數據。主要方法：平板涂布計數、抑菌圈測試、OD值測試、MIC/MBC等。

　　1、平板涂布計數簡介

　　將待測樣品與菌液共培養后，取一定量的稀釋樣液涂布到平板上，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個單菌落應代表原樣品中的一個單細胞;統計菌落數，根據其稀釋倍數和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數。通過與組內或者組間比較，從而得到樣品對測試菌株的抗菌性能。

　　參照標準 ：

　　GBT 31402-2015 塑料 塑料表面抗菌性能試驗方法

　　JCT 1054-2007 鍍膜抗菌玻璃

　　GBT 20944.3-2008 紡織品抗菌性能的評價 第3部分震蕩法

　　GBT 21510-2008 納米無機材料抗菌性能檢測方法

　　2、抑菌圈測試簡介

　　抑菌圈法是衡量殺菌防霉劑效果的一種方式，主要用于測定殺菌防霉劑對細菌、霉菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通過殺菌防霉劑在瓊脂平板上的擴散能力來初步篩選更有效的殺菌防霉劑品種。主要方法：K-B法(Kirby-Bauer test)、打孔、牛津杯。

　　參照標準：

　　GB/T 39101-2020 多肽抗菌性測定 抑菌圈法

　　3、OD值測試

　　待測樣品與菌液共培養后，細菌生長的培養液濁度與細菌濃度成正比，通過測試培養液的OD值來表征待測材料的抗菌效果。

　　4、MIC/MBC

　　z低抑菌濃度(MIC)：能夠抑制培養基內細菌生長的z低藥物濃度;z小殺菌濃度(MBC)：能夠殺滅培養基內細菌生長的z低藥物濃度，殺死99.9%的供試微生物所需的z低藥物濃度。MIC和MBC都可用來評價藥物抑菌或者殺菌作用的強弱，數值越小，藥物的作用越強。

　　參照標準：

　　GB/T27623.1-2011 漁用抗菌藥物藥效試驗技術規范 第1部分:常量肉湯稀釋法 藥物敏感性試驗

　　YY/T 0688.1-2008臨床實驗室檢測和體外診斷系統　感染病原體敏感性試驗與抗菌劑敏感性試驗設備的性能評價

　　二、樣品要求

　　1、平板涂布計數

　　a.塊體類：薄膜、金屬塊、鍍膜玻璃等(具備一定的表面積)。送樣量：樣本量為1個/次重復/種菌。樣本尺寸：要求測試面積大于等于1.5×1.5cm，大于該面積按照比例添加菌液。

　　b.液體類：送樣量根據測試時樣本的溶劑和濃度而定，濃度由樣品特性及實驗目的而定，需要客戶確定，一般不超過500ul(5ml菌液的10%)。

　　c.粉末類：送樣量：需要提供樣本與菌液的培養體系，比如X g樣本/mL菌液，樣本量為X g/次重復/種菌。若無相關參考，一般可提供5mg，用5ml菌液孵育24h，進行嘗試。

　　2、抗菌圈測試

　　a.塊體類：薄膜、布料、金屬塊、紙片、凝膠等

　　制樣要求：金屬塊、凝膠類樣本須制備成統一大小的圓形/方形，建議制備直徑為6 mm圓形。布料、紙片類樣本可代為裁剪，默認制備直徑為6 mm。若樣品太脆無法裁剪，可稱取相應質量(一般100mg)材料，用1mlPBS浸泡12h，制備成藥敏片，進行嘗試，也可根據具體情況定制。

　　注：凝膠樣本須保證樣本在培養條件下(一般為37℃)不融化。

　　b.液體類：(需制備藥敏片)

　　送樣量：根據測試時樣本濃度而定，一般為1 mL/種菌，如需稀釋請告知稀釋倍數，濃度若無相關參考，一般可采用1mg/ml 進行嘗試。

　　c.粉末類：(需打孔)

　　打孔器打6 mm直徑的孔，原則上需要粉末填充充滿所打的孔，一般z少需要1g粉末樣品。建議制作分散液，按照等體積加樣(每個孔z大加樣量為0.2 mL)。

　　3、OD值測試

　　a.塊體類：薄膜、布料、金屬塊、紙片、凝膠等。送樣量：由樣品特性及實驗目的而定，需要提供樣本與菌液的培養體系。若無相關參考，一般采用96孔法，每個樣品需要提供3mg進行嘗試。

　　b.液體類(要求樣本溶液無色或者淡色)。由樣品特性及實驗目的而定，需要客戶確定，一般采用96孔法，若無相關參考，每個樣品需要提供200ul，母液濃度一般1mg/ml，進行嘗試。

　　4、MIC/MBC

　　粉末/液體類(要求樣本溶液，完全溶解且無色或者淡色)-微孔板法 ;提供的粉末必須可溶，根據CLSI標準，z大母液濃度512ug/ml，如果不參照標準，則可自行定濃度。

　　三、結果展示

　　1、平板涂布計數

　　默認3個技術重復，結果為三個計數(含照片)和平均值。以大腸桿菌為例：

　　對照組 樣品1

　　2、抗菌圈測試

　　結果反饋三個平板帶抑菌圈和測量的抑菌圈，每個抑菌圈測量三次取平均值。

　　3、OD值測試

　　默認3個技術重復，即每個點交付3次OD值。

　　4、MIC

　　MIC結果為肉眼可見無細菌生長的z小濃度，默認三個重復(拍照一次)，z終告知哪個濃度無細菌生長(如下表)，也可掃OD 。

　　(注意：樣品有顏色，OD值顯示不準確，不建議掃OD)

　　注：-表示無細菌生長，+表示有細菌生長。

　　由測試結果可知，樣品A的MIC為16μg/ml，對照諾氟沙星的MIC為2μg/ml，樣品A的MBC為32μg/ml。

　　四、常見問題

　　1、培養基配置應注意的問題

　　1)滅菌溫度要嚴格控制，按照要求滅菌，尤其含糖量較高的培養基溫度不應太高，過高會導致糖分焦化，影響質量。

　　2)瓊脂培養基不能反復溶化。反復溶化會破壞培養基中的營養成分。

　　3)培養基不能反復滅菌，反復滅菌也會導致營養成分的破壞。

　　4)含瓊脂的培養基滅菌后，要搖勻。

　　2、常規菌株需要設置抗生素對照組嗎?

　　一般菌株為常規菌株，不耐藥，做抗生素對照意義不大。

　　3、液體樣品溶劑需要注意哪些?

　　溶劑為DMSO的液體樣本，需注意純的DMSO會殺菌的，建議溶劑DMSO低于5%，并做陰性對照。其他溶解可與工作人員聯系。