天狼猩紅和KWS都是強酸性染料，易與膠原分子中的堿性基團結合，吸附牢固。偏振光鏡檢查，膠原纖維有正的單軸雙折射光的屬性，與KWS-天狼猩紅結合，可增強雙折射，提高分辨率，從而區分兩型膠原纖維。未脫鈣骨組織切片經天狼猩紅染色后，普通光學顯微鏡下，膠原纖維呈紅色或鮮紅色，其他呈黃色;在偏振光顯微鏡下，Ⅰ型膠原纖維呈強橙黃色或亮紅色，Ⅲ型膠原纖維呈綠色。