超氧化物歧化酶(SOD, Superoxide Dismutase)是一種重要的抗氧化酶，能夠催化超氧陰離子自由基(O??)轉化為過氧化氫(H?O?)和氧氣(O?)，在生物體內起到保護細胞免受氧化損傷的作用。測定SOD活性對于研究其生物學功能、評估樣品中的抗氧化能力以及探索其在醫學和工業上的應用具有重要意義。以下是幾種常用的SOD活性測定方法：

　　常用的測定方法

　　氮藍四唑法(NBT法)

　　原理：在光照條件下，核黃素可以還原氧氣生成超氧陰離子自由基，這些自由基能與氮藍四唑(NBT)反應生成藍色甲臜。SOD通過清除超氧陰離子自由基減少甲臜的形成，因此可以通過測量吸光度的變化來間接計算SOD的活性。

　　操作步驟：

　　準備含有核黃素、甲硫氨酸和NBT的反應混合液。

　　加入不同濃度的SOD樣本，在特定波長(通常為560 nm)下測定吸光度。

　　根據對照組和實驗組之間的吸光度差異計算SOD抑制率，并據此推算出SOD活性。

　　鄰苯三酚自氧化法

　　原理：鄰苯三酚在堿性條件下可自發氧化釋放出超氧陰離子自由基，同時自身顏色變深。SOD的存在會減緩這一過程的顏色變化速度，從而可以通過監測吸光度隨時間的變化來測定SOD活性。

　　操作步驟：

　　將鄰苯三酚溶解于Tris-HCl緩沖液中，調整pH值至適當范圍。

　　加入待測樣品，在325 nm或420 nm波長下記錄吸光度隨時間的變化情況。

　　分析數據以確定SOD活性。

　　細胞色素C還原法

　　原理：超氧陰離子自由基能夠將細胞色素C還原，產生特征性的吸收峰。SOD通過清除超氧陰離子自由基而降低細胞色素C的還原速率，從而可通過測量細胞色素C還原速率的變化來評估SOD活性。

　　操作步驟：

　　制備含xanthine/xanthine oxidase系統的反應體系，該系統可在體外生成超氧陰離子自由基。

　　添加不同濃度的SOD樣本，在550 nm處監測細胞色素C還原速率。

　　根據對照組和實驗組之間的還原速率差異計算SOD活性。

　　注意事項

　　在進行任何一種測定之前，應確保所有試劑的新鮮度和穩定性，避免因儲存不當導致的結果偏差。

　　控制好實驗條件(如溫度、pH值等)，因為它們對酶活性有很大影響。

　　對于不同的生物樣本類型(如血清、組織勻漿等)，可能需要預先優化處理步驟以獲得z佳結果。

　　標準曲線的建立有助于提高定量分析的準確性。