細胞油紅O染色是一種常用的組織化學方法，主要用于檢測和定量細胞內脂質的積累情況。這種方法廣泛應用于脂肪細胞生物學、動脈粥樣硬化研究以及評估細胞在不同條件下的脂質代謝狀態等。以下是關于油紅O染色及其定量的基本步驟和技術要點。

　　油紅O染色步驟

　　樣品準備

　　對于貼壁生長的細胞：先用PBS清洗細胞2-3次以去除培養基殘留。

　　對于冷凍切片或固定后的組織樣本：確保樣本已經過適當的處理(如4%多聚甲醛固定)并置于載玻片上。

　　固定

　　使用10%中性緩沖福爾馬林或4%多聚甲醛固定細胞或組織切片，通常固定時間為10-20分鐘。

　　固定后再次用PBS清洗。

　　染色液制備

　　制備新鮮的60%異丙醇溶液中的油紅O工作液。一般推薦將0.5% (w/v)的油紅O儲液與60%異丙醇按比例混合，并過濾除去不溶物。

　　染色

　　將固定并清洗過的樣本浸泡于預冷的油紅O染色液中，室溫下染色15-30分鐘。

　　染色完成后，用60%異丙醇快速沖洗掉多余的染料，然后用水洗去殘留酒精。

　　封片觀察

　　可直接用顯微鏡觀察染色結果，或者用含甘油的封片劑覆蓋樣本后加蓋蓋玻片長期保存。

　　定量分析

　　直接視覺評估

　　通過顯微鏡觀察染色強度來粗略估計脂質含量的變化。這種方法主觀性強，適合初步篩查。

　　圖像分析軟件定量

　　圖像采集：使用光學顯微鏡拍攝染色樣本的照片。

　　圖像處理：

　　導入圖像到專業的圖像分析軟件(如ImageJ)。

　　轉換圖像色彩模式為灰度圖或二值化處理，以便于區分背景和染色區域。

　　設置閾值以突出顯示被染色的脂滴。

　　測量選定區域內所有脂滴的總面積或平均面積作為脂質含量的指標。

　　光密度測定

　　如果需要更精確地量化染色強度，可以采用分光光度計測量溶解于特定溶劑中的染料吸光度。具體步驟如下：

　　在染色完畢后，從載玻片上去除油紅O，將其溶解于100%異丙醇中。

　　使用分光光度計在520 nm波長處讀取吸光度值，該值與樣本中的脂質含量成正比。

　　注意事項

　　確保使用的油紅O染料純度足夠高，避免雜質干擾實驗結果。

　　控制好染色時間和溫度，因為它們會影響染色效果。

　　樣本之間的比較應在相同條件下進行，包括染色時間、顯微鏡設置等，以保證數據的一致性和可靠性。