行業(yè)信息
1. 熒光探針法
JC-1(常用探針):
原理:高ΔΨm時形成紅色J聚集體(Ex/Em=585/590 nm),低ΔΨm時呈綠色單體(Ex/Em=514/529 nm)。
步驟:
細胞加載JC-1(2.5 μM,37℃孵育20分鐘)。
流式細胞術(shù)或熒光顯微鏡檢測紅綠熒光比值(紅/綠↓表示ΔΨm下降)。
優(yōu)勢:比值法減少細胞數(shù)量與探針負載量干擾。
TMRM/TMRE(電位依賴性探針):
原理:ΔΨm越高,探針在線粒體基質(zhì)內(nèi)積累越多(熒光強度↑)。
注意事項:需避免光漂白,建議使用低濃度(50-100 nM)與共聚焦實時成像。
2. 電化學(xué)檢測法
氧電極法:通過耗氧率間接反映ΔΨm(需聯(lián)合ATP合酶抑制劑)。
膜片鉗技術(shù):直接測量線粒體膜電位(適用于分離線粒體,技術(shù)難度高)。
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