1. 實驗設計關鍵步驟

　　細胞刺激與阻斷：

　　使用布雷菲德菌素A(BFA)或莫能菌素抑z細胞因子分泌，促進胞內累積。

　　抗原特異性刺激：HIV Gag肽庫(5 μg/mL)激活CD8+ T細胞。

　　細胞表面染色：標記CD3、CD4、CD8等表型抗體(避光，4℃孵育30分鐘)。

　　固定與破膜：

　　固定液(4%多聚甲醛)維持細胞形態。

　　破膜劑(0.1% Triton X-100或商品化試劑盒)穿透細胞膜。

　　胞內染色：加入IFN-γ、IL-2等熒光標記抗體(室溫避光孵育1小時)。

　　2. 流式細胞術參數設置

　　電壓與補償：單陽對照調節PMT電壓，補償矩陣消除熒光溢出。

　　設門策略：

　　排除死細胞(DAPI或Fixable Viability Dye)。

　　圈選CD3+CD4+或CD3+CD8+群體，分析細胞因子雙陽性細胞比例。