蔗糖合酶(Sucrose Synthase, SS)活性的測定通常基于其催化蔗糖分解為果糖和UDP-葡萄糖的反應。以下是常用的測定方法：

　　1. 原理

　　蔗糖合酶催化以下反應：

      通過測定反應產物(果糖或UDP-葡萄糖)的生成量，可以計算蔗糖合酶的活性。

　　2. 儀器與試劑

　　儀器

　　分光光度計：用于測定吸光度。

　　恒溫水浴：控制反應溫度(通常為30°C或37°C)。

　　離心機：用于分離反應液。

　　移液管：1 mL、5 mL、10 mL。

　　試管：用于反應和測定。

　　試劑

　　蔗糖：底物。

　　UDP：底物。

　　果糖標準溶液：用于繪制標準曲線。

　　DNS試劑(3,5-二硝基水楊酸)：用于測定還原糖。

　　緩沖液(pH 7.0)：如Tris-HCl或磷酸緩沖液。

　　酶提取液：從樣品中提取蔗糖合酶。

　　3. 測定步驟

　　3.1 酶提取

　　樣品處理：

　　取植物組織(如葉片或根)，洗凈并切碎。

　　加入預冷的提取緩沖液(如50 mM Tris-HCl, pH 7.0)，勻漿。

　　離心：

　　將勻漿液在4°C下離心(10,000 g，15分鐘)。

　　取上清液作為酶提取液。

　　3.2 酶反應

　　反應體系：

　　在試管中加入以下成分：

　　0.5 mL酶提取液

　　0.5 mL 100 mM蔗糖溶液

　　0.5 mL 10 mM UDP溶液

　　1.5 mL緩沖液(pH 7.0)

　　反應：

　　將試管放入30°C或37°C恒溫水浴中，反應30分鐘。

　　終止反應：

　　加入2 mL DNS試劑，煮沸5分鐘，終止反應并顯色。

　　冷卻至室溫。

　　3.3 測定

　　離心：

　　將反應液離心(3000 rpm，10分鐘)，取上清液。

　　測定吸光度：

　　在540 nm波長下測定上清液的吸光度。

　　4. 標準曲線繪制

　　配制標準系列：

　　分別取0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL果糖標準溶液，加入試管中。

　　分別加入1 mL緩沖液和1 mL DNS試劑。

　　反應與測定：

　　煮沸5分鐘，冷卻至室溫。

　　在540 nm波長下測定吸光度。

　　繪制標準曲線：

　　以果糖濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

　　5. 計算

　　計算果糖濃度：

　　根據樣品吸光度，從標準曲線中查得果糖濃度 CC(mg/mL)。

　　計算酶活性：

　　其中：

　　CC：果糖濃度(mg/mL)。

　　VV：反應液體積(mL)。

　　DD：稀釋倍數。

　　WW：樣品重量(g)。

　　TT：反應時間(h)。

　　6. 注意事項

　　樣品處理：確保樣品新鮮，避免酶活性損失。

　　反應溫度：嚴格控制反應溫度，避免影響酶活性。

　　DNS試劑：DNS試劑需現配現用，避免失效。

　　重復測定：每個樣品至少重復測定三次，取平均值。

　　空白對照：每次測定需設置空白對照(用蒸餾水代替酶提取液)。

　　7. 參考標準

　　GB/T 35882：植物酶活性測定方法。

　　ISO 5725：測定方法的精密度和準確度。