細胞免疫功能的檢測是評估機體免疫系統(tǒng)狀態(tài)的重要手段，主要通過檢測免疫細胞的數(shù)量、活性、功能及其分泌的細胞因子等指標來實現(xiàn)。以下是常見的細胞免疫功能檢測方法：

　　1. 免疫細胞數(shù)量檢測

　　(1)流式細胞術(Flow Cytometry)

　　原理：利用熒光標記的抗體特異性結合細胞表面或內(nèi)部的標志物，通過流式細胞儀檢測免疫細胞的數(shù)量和比例。

　　檢測指標：

　　T細胞(CD3+)、B細胞(CD19+)、NK細胞(CD56+)。

　　T細胞亞群：輔助T細胞(CD4+)、細胞毒性T細胞(CD8+)。

　　優(yōu)點：快速、準確，可同時檢測多種細胞類型。

　　(2)血常規(guī)檢測

　　原理：通過全自動血細胞分析儀檢測外周血中白細胞總數(shù)及分類(如淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞)。

　　優(yōu)點：簡單、快速，適用于初步篩查。

　　2. 免疫細胞活性檢測

　　(1)淋巴細胞增殖實驗

　　原理：利用促有絲分裂原(如PHA、ConA)或特異性抗原刺激淋巴細胞，通過檢測細胞增殖情況評估免疫細胞活性。

　　檢測方法：

　　MTT法：檢測細胞代謝活性。

　　CFSE染色法：通過流式細胞術檢測細胞分裂次數(shù)。

　　3H-TdR摻入法：檢測DNA合成情況。

　　優(yōu)點：直接反映免疫細胞的增殖能力。

　　(2)細胞毒性實驗

　　原理：檢測細胞毒性T細胞(CTL)或NK細胞對靶細胞的殺傷能力。

　　檢測方法：

　　LDH釋放法：檢測靶細胞損傷后釋放的乳酸脫氫酶(LDH)。

　　51Cr釋放法：檢測靶細胞釋放的放射性同位素51Cr。

　　流式細胞術：通過標記靶細胞檢測其凋亡或壞死。

　　優(yōu)點：直接反映免疫細胞的殺傷功能。

　　3. 細胞因子檢測

　　(1)ELISA法

　　原理：利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清或血清中的細胞因子(如IL-2、IFN-γ、TNF-α)。

　　優(yōu)點：靈敏度高，操作簡單。

　　(2)流式細胞術(CBA技術)

　　原理：利用流式細胞術結合微球陣列(CBA)技術，同時檢測多種細胞因子。

　　優(yōu)點：高通量，可同時檢測多種指標。

　　(3)實時熒光定量PCR(qPCR)

　　原理：檢測免疫細胞中細胞因子相關基因的表達水平。

　　優(yōu)點：靈敏度高，可檢測基因表達變化。

　　4. 免疫細胞功能相關標志物檢測

　　(1)表面標志物檢測

　　原理：通過流式細胞術檢測免疫細胞表面功能相關標志物(如CD25、CD69、PD-1、CTLA-4)。

　　優(yōu)點：反映免疫細胞的活化狀態(tài)和功能。

　　(2)細胞內(nèi)標志物檢測

　　原理：通過流式細胞術檢測免疫細胞內(nèi)功能相關分子(如穿孔素、顆粒酶、FoxP3)。

　　優(yōu)點：反映免疫細胞的功能特性。

　　5. 其他檢測方法

　　(1)皮膚試驗

　　原理：通過皮內(nèi)注射抗原(如結核菌素)，觀察局部免疫反應(紅腫、硬結)。

　　優(yōu)點：簡單、直觀，反映機體細胞免疫狀態(tài)。

　　(2)混合淋巴細胞反應(MLR)

　　原理：將兩種不同來源的淋巴細胞混合培養(yǎng)，檢測其增殖反應。

　　優(yōu)點：反映T細胞的識別和反應能力。

　　6. 注意事項

　　樣本處理：確保樣本新鮮，避免細胞活性下降。

　　對照設置：設置陰性對照和陽性對照，確保實驗結果的可靠性。

　　數(shù)據(jù)分析：結合多種檢測方法，全面評估細胞免疫功能。