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ITC的工作原理及實驗數據分析

更新時間:2025-03-18 點擊次數:0 所屬欄目:行業信息

  等溫滴定量熱法(Isothermal Titration Calorimetry, ITC)是一種用于研究分子間相互作用的熱力學分析方法。它通過測量反應過程中釋放或吸收的熱量,提供結合常數(K)、焓變(ΔH)、熵變(ΔS)和化學計量數(n)等熱力學參數。ITC廣泛應用于生物化學、藥物研發、材料科學等領域,用于研究蛋白質-配體、DNA-藥物、酶-底物等分子間的相互作用。

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  ITC的核心是測量在恒溫條件下,將一種反應物(滴定劑)逐步加入另一種反應物(樣品)時產生的熱量變化。儀器通過高靈敏度的熱敏元件檢測微小的溫度變化,并將其轉化為熱量信號。

  實驗過程:

  樣品池:裝入待測樣品(如蛋白質、DNA等)。

  滴定劑:裝入與樣品相互作用的分子(如配體、藥物等)。

  滴定:將滴定劑逐步加入樣品池,記錄每次加入后的熱量變化。

  數據分析:通過擬合熱量變化曲線,計算熱力學參數。


  ITC的數據分析

  ITC實驗得到的數據是熱量隨滴定劑加入量的變化曲線(熱譜圖)。通過擬合熱譜圖,可以獲得以下參數:

  結合常數(K):反映分子間相互作用的強度。

  焓變(ΔH):反映反應過程中的熱量變化。

  熵變(ΔS):反映反應過程中系統的無序度變化。

  化學計量數(n):反映結合位點的數量。

  擬合模型:

  單一位點模型:適用于簡單的1:1結合反應。

  多位點模型:適用于多個結合位點的復雜反應。

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