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氨基酸是構成蛋白質的基本單位,不僅關系到人體的健康狀況,還是人體進行正常代謝所必需的物質。目前已知的氨基酸有300多種,但存在于天然食物中的只有20多種。氨基酸含量的測試方法有多種,以下是幾種常見的方法:
1. 高效液相色譜法(HPLC)
原理:利用高效液相色譜分離氨基酸,通過紫外或熒光檢測器測定其含量。
步驟:
樣品前處理:將樣品水解或提取,釋放氨基酸。
衍生化處理:將氨基酸與衍生化試劑反應,生成可檢測的衍生物。
使用HPLC儀分離氨基酸衍生物,通過檢測器測定其含量。
分析色譜圖,定量測定氨基酸含量。
優點:靈敏度高,分離效果好。
缺點:操作復雜,需衍生化處理。
2. 氨基酸分析儀法
原理:專用氨基酸分析儀通過離子交換色譜分離氨基酸,采用茚三酮顯色法測定其含量。
步驟:
樣品前處理:將樣品水解或提取,釋放氨基酸。
使用氨基酸分析儀分離氨基酸,通過茚三酮顯色反應測定其含量。
分析色譜圖,定量測定氨基酸含量。
優點:專一性強,結果準確。
缺點:設備昂貴,操作復雜。
3. 氣相色譜-質譜聯用法(GC-MS)
原理:通過氣相色譜分離氨基酸衍生物,質譜鑒定其分子結構,測定其含量。
步驟:
樣品前處理:將樣品水解或提取,釋放氨基酸。
衍生化處理:將氨基酸與衍生化試劑反應,生成可揮發的衍生物。
使用GC-MS儀分離氨基酸衍生物,通過質譜鑒定和定量。
分析質譜圖,定量測定氨基酸含量。
優點:靈敏度高,可鑒定多種氨基酸。
缺點:操作復雜,需衍生化處理。
4. 紫外-可見分光光度法
原理:利用氨基酸與特定試劑反應生成有色物質,通過紫外-可見分光光度計測定其吸光度,計算氨基酸含量。
步驟:
樣品前處理:將樣品水解或提取,釋放氨基酸。
顯色反應:將氨基酸與顯色試劑反應,生成有色物質。
使用紫外-可見分光光度計測定吸光度。
根據標準曲線計算氨基酸含量。
優點:操作簡便,成本低。
缺點:靈敏度較低,選擇性較差。
5. 酶法
原理:利用特定酶與氨基酸反應,通過測定反應產物的量來計算氨基酸含量。
步驟:
樣品前處理:將樣品水解或提取,釋放氨基酸。
酶反應:將氨基酸與特定酶反應,生成可檢測的產物。
使用分光光度計或熒光計測定反應產物的量。
根據標準曲線計算氨基酸含量。
優點:特異性強,靈敏度高。
缺點:酶試劑昂貴,操作復雜。
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