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免疫組化(IHC)和免疫熒光(IF)是兩種常用的實驗技術,用于檢測組織或細胞中特定蛋白質的表達和定位。以下是它們的簡要介紹和區別:
免疫組化(IHC)
原理:利用抗體與目標抗原的特異性結合,通過酶促反應產生可見的顯色信號。
步驟:
樣本固定和包埋。
切片和抗原修復。
封閉非特異性結合位點。
一抗孵育。
二抗(偶聯酶)孵育。
顯色反應。
顯微鏡觀察。
優點:
結果穩定,適合長期保存。
普通光學顯微鏡即可觀察。
適用于病理診斷和研究。
缺點:
通常只能檢測一種抗原。
靈敏度較低。
免疫熒光(IF)
原理:利用熒光標記的抗體與目標抗原結合,通過熒光顯微鏡觀察。
步驟:
樣本固定和包埋。
切片和抗原修復。
封閉非特異性結合位點。
一抗孵育。
熒光標記的二抗孵育。
熒光顯微鏡觀察。
優點:
可同時檢測多種抗原。
靈敏度高。
適合活細胞和動態過程研究。
缺點:
熒光易淬滅,結果不易長期保存。
需要熒光顯微鏡。
主要區別
檢測信號:
IHC:顯色反應。
IF:熒光信號。
顯微鏡:
IHC:普通光學顯微鏡。
IF:熒光顯微鏡。
多重檢測:
IHC:通常單種抗原。
IF:可同時檢測多種抗原。
靈敏度:
IHC:較低。
IF:較高。
結果保存:
IHC:可長期保存。
IF:熒光易淬滅,保存時間短。
應用
IHC:病理診斷、腫瘤標記物檢測。
IF:細胞生物學研究、蛋白質共定位。
總結
IHC和IF各有優勢,選擇取決于實驗需求。IHC適合長期保存和病理診斷,IF適合高靈敏度和多重檢測。
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