一、簡介

　　蛋白免疫印跡(Western Blot，簡稱WB)是一種能夠從細胞或組織提取的復雜蛋白質混合物中檢測靶蛋白并對其進行半定量的常用實驗技術，還可以鑒定和定量蛋白質中翻譯后修飾的氨基酸。與蛋白質科學中其他常用的分析技術(如ELISA、IHC、質譜法和顯微鏡觀察等)相比，WB可提供有關蛋白質分子量信息，區分分子量相近的蛋白，適合檢測低豐度蛋白和同時檢測多個目的蛋白，并在蛋白質純化或評估細胞中蛋白質表達水平時具有一定的優勢。該方法廣泛應用于分子生物學、生物化學、免疫遺傳學等分子生物學領域。

　　二、原理

　　WB利用 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)，將抗體作為探針，標記的二抗作為顯色工具，來分離指定樣品中包含的各種蛋白質。將分離的蛋白質樣品轉移到固相載體(如硝酸纖維素或PVDF 膜)上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。接下來，將膜與對感目標蛋白質的特異抗體一起孵育。在洗膜過程中，未結合的抗體被洗掉，只留下與目標蛋白質結合的抗體，最后通過顯影膠片或熒光掃描來檢測結合的抗體。

　　根據原理，蛋白免疫印跡可分為兩種方法：直接法、間接法。

　　表1. 兩種方法的優缺點