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實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR體系中加入熒光染料或熒光探針,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過CT值和標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。具有PCR技術快速、靈敏的特點,同時還具有更高的特異性、實時監測和可重復精確定量等優勢。
熒光染料法:實驗設計簡單(僅需2個引物,無需設計探針),初始成本低,靈敏度高,但需要進行熔解曲線分析檢驗擴增反應的特異性。適用于非特異性檢測(專一性要求不高或高通量檢測)。
探針法:有高特異性(引物和探針共同于模板結合),高信噪比,能進行多重反應。但成本高,實驗設計繁瑣。適用于擴增序列專一檢測。
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