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TUNEL染色是一種用于檢測細胞凋亡的技術,全稱為“脫氧核糖核苷酸末端轉移酶介導的缺口末端標記法”(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Mediated dUTP Nick End Labeling)。這項技術基于細胞凋亡過程中DNA的斷裂,產(chǎn)生大量的3'-OH末端。通過脫氧核糖核苷酸末端轉移酶(TdT)的作用,可以將熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素標記的脫氧核糖核苷酸標記到這些3'-OH末端上,從而實現(xiàn)對凋亡細胞的可視化檢測。
TUNEL染色的操作步驟
樣本制備:如果是組織樣本,通常需要制作成石蠟切片或冷凍切片。
脫蠟和水化:如果是石蠟切片,需要用二甲苯脫蠟并經(jīng)過不同濃度的乙醇進行水化。
洗滌:用PBS(磷酸鹽緩沖液)洗滌數(shù)次,去除殘留的有機溶劑。
蛋白酶K處理:使用蛋白酶K處理樣本,幫助TdT更好地接近DNA末端。
洗滌:再次用PBS洗滌去除多余的蛋白酶K。
TUNEL反應:加入含有TdT和熒光素標記dUTP的混合物,讓其與DNA的3'-OH末端反應。
封固:用適當?shù)姆夤虅┓夤虡颖尽?/p>
檢測:使用熒光顯微鏡觀察并拍照記錄。
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