知識分享
1、細胞劃痕
實驗流程如下:
(1)先用marker筆在6孔板背后,直尺比著,均勻得劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
(2)在孔中加入計數好的細胞,具體數量因細胞不同而定(過夜能鋪滿即可)。
(3)第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。
(4)用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養基。
(5)放入37度5%二氧化碳培養箱,培養0,6,12,24小時后取樣,拍照。
注意:所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)。
實驗流程如下:
(1) 換無血清或低血清培養基培養細胞,排除血清的影響。
(2)鋪下室培養基:下室鋪培養基(液體需剛剛好);
制備細胞懸液:使用胰酶消化細胞,制備細胞懸液;
鋪上室細胞:將上層小室放入下層小室,將細胞鋪在上層小室中。
(3)繼續培養:細胞培養箱中培養 24-48 小時,具體時間根據不同細胞而定。
(4)染色:先使用固定液固定細胞(防止細胞形態發生改變),然后使用結晶紫進行染色。
(5)拍攝及數據分析。
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