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生物膜干涉(Bio-Layer Interferometry, BLI)是一種用于實時監測和量化生物分子間相互作用的技術。這項技術特別適用于檢測蛋白、抗體、核酸、細胞受體以及其他生物大分子間的結合事件。BLI的基本原理是通過檢測生物膜厚度的變化來間接測量分子結合的動力學參數,如結合常數(Ka或kon)和解離常數(Kd或koff),從而計算出親和力(KD)和濃度信息。
下面是BLI技術的簡要工作流程:
生物傳感器準備:一個光纖生物傳感器被固定在一個裝置上,其末端覆蓋有一層薄薄的生物膜。這層生物膜通常是通過化學反應預先固定了某種目標生物分子(捕獲分子)。
白光發射:儀器發射白光到生物傳感器的表面,光線在生物膜和周圍介質的界面上發生反射,形成干涉圖案。
反射光譜記錄:儀器收集反射回來的光譜,并記錄不同波長的光強度。由于生物膜厚度的變化會影響光的干涉模式,因此反射光譜會隨著分子結合事件的發生而改變。
分子結合:當一個未標記的分析物(如蛋白質、抗體或核酸)與傳感器上的捕獲分子結合時,生物膜的厚度會增加,引起反射光譜的位移。
實時監測:系統實時監測這些光譜位移,從而跟蹤分子結合和解離的動態過程。
數據分析:通過軟件分析反射光譜的位移,可以計算出結合和解離的速率常數,進而推算出親和力(KD)等重要參數。
BLI技術的優勢包括:
不需要對樣品進行標記,減少了樣品制備的復雜性;
實時監測,能夠提供動力學和親和力的詳細信息;
需要的樣品量很少,適合珍貴樣品的檢測;
操作簡單,自動化程度高,可以進行高通量篩選。
BLI技術廣泛應用于藥物發現、抗體篩選、蛋白質組學、疾病標志物識別等領域。其中,Octet平臺是基于BLI技術的代表性系統,在生物醫學研究和制藥行業中得到了廣泛應用。
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