脂肪酶(Lipase)是一類能夠催化脂肪水解成甘油和脂肪酸的酶。脂肪酶活性測定是評估其催化效率的重要方法，廣泛應用于生物化學、食品科學以及醫學研究等領域。脂肪酶活性的測定通常依賴于測量底物轉化產物的生成速率或消耗速率。以下是幾種常見的脂肪酶活性測定方法：

　　1. 酶聯免疫吸附測定法(ELISA)

　　雖然ELISA主要用于抗原-抗體反應的檢測，但通過特定設計也可以用于酶活性的測定。不過，這種方法不常用在脂肪酶活性直接測定中。

　　2. 分光光度法

　　這是常用的脂肪酶活性測定方法之一。它基于脂肪酶催化下底物(如橄欖油或其他長鏈甘油三酯)分解產生的游離脂肪酸可以通過顯色試劑轉化為有色物質，然后使用分光光度計在特定波長下測量吸光度的變化來計算酶活性。

　　pH-stat法：通過滴定釋放出的脂肪酸來維持溶液pH值恒定，根據消耗的堿量來確定脂肪酶活性。

　　銅皂化法：利用銅離子與脂肪酸形成可溶性絡合物，在特定條件下該絡合物具有特征吸收峰，可通過分光光度法定量分析。

　　3. 熒光法

　　某些熒光探針可以在脂肪酶的作用下發生熒光強度的變化，從而實現對脂肪酶活性的檢測。例如，使用熒光標記的甘油三酯作為底物，脂肪酶作用后會改變熒光信號，通過測量熒光強度變化來反映酶活性。

　　4. 比濁法

　　當底物被脂肪酶水解后，若生成的產物能引起溶液濁度增加，則可通過比濁法來間接測定脂肪酶活性。

　　5. 高效液相色譜法(HPLC)

　　對于需要高靈敏度和特異性的場合，可以采用高效液相色譜技術分離并定量分析脂肪酶催化的產物，如甘油和各種脂肪酸。

　　實驗步驟示例(以分光光度法為例)

　　準備底物溶液：配置適當濃度的甘油三酯乳化液作為底物。

　　設定反應條件：調整緩沖液pH值、溫度等至適宜脂肪酶活性的z佳條件。

　　啟動反應：加入適量脂肪酶樣品開始反應。

　　監測產物生成：每隔一定時間取樣，添加顯色劑后用分光光度計測量吸光度。

　　數據分析：繪制吸光度隨時間變化曲線，計算斜率，進而得到酶活性單位。