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HE染色,全稱為蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin and Eosin staining),是組織學中最常用的一種染色方法。它通過使用兩種主要染料——蘇木精和伊紅對生物樣本進行染色,以便在顯微鏡下觀察細胞結構和組織形態。以下是HE染色的基本原理及其步驟:
基本原理
蘇木精染色:
蘇木精是一種堿性染料,能夠與細胞核內的酸性物質結合,主要是與染色質中的DNA以及核糖體RNA相結合。
這些酸性物質通常被稱為嗜堿性(basophilic),因為它們容易接受或“喜愛”堿性染料。因此,在HE染色過程中,細胞核及富含RNA的區域(如粗面內質網)會被蘇木精染成藍紫色。
伊紅染色:
伊紅是一種酸性染料,可以與細胞漿和其他細胞外基質中的堿性成分結合,比如蛋白質。
細胞漿和細胞外基質中的這些成分通常是嗜酸性的(acidophilic),即傾向于結合酸性染料。在HE染色中,這些部分會被伊紅染成不同程度的粉紅色至紅色。
染色過程概述
盡管具體的HE染色程序可能因實驗室的具體條件而略有不同,但基本流程大致如下:
脫蠟和水化:如果使用的是石蠟包埋的切片,則首先需要通過一系列溶劑去除石蠟,并逐步將切片水化。
蘇木精染色:將切片浸入蘇木精溶液中一段時間(通常幾分鐘),使細胞核及其他嗜堿性結構著色。
分化:用酸性酒精溶液處理以去除過量的蘇木精并增強對比度,這一過程被稱為“分化”。之后需用水充分沖洗切片以終止分化作用。
藍化:為了使蘇木精染上的顏色更加鮮明,常會用弱堿性溶液(如氨水或溫水)處理切片,這個步驟也叫“藍化”。
伊紅染色:隨后將切片放入伊紅溶液中浸泡,使細胞質和其他嗜酸性結構染上顏色。
脫水、透明和封片:最后,通過一系列遞增濃度的乙醇脫水,再用二甲苯或其他透明劑透明處理,然后用樹脂封片劑固定蓋玻片完成整個過程。
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