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宏基因組高通量測序(Metagenomic Sequencing)是一種用于研究復雜微生物群落的技術,它不依賴于傳統的純培養方法,而是直接從環境樣本(如土壤、水體、人體腸道等)中提取所有微生物的DNA進行測序。這種方法能夠揭示微生物群落的組成、功能潛力以及它們與環境或宿主之間的相互作用。
宏基因組高通量測序的主要步驟包括:
1. 樣品采集
根據研究目的選擇合適的樣本類型和采樣方法。確保樣品的代表性和完整性對于后續分析至關重要。
2. DNA提取
從復雜的環境樣本中提取高質量的總DNA是宏基因組學研究的基礎。不同的樣本類型可能需要采用特定的DNA提取方案以z大化地回收微生物DNA,并盡量減少宿主或其他非目標生物DNA的污染。
3. 文庫構建
將提取到的DNA片段化成適合測序儀讀長的小片段,然后在這些片段兩端加上接頭序列,形成測序文庫。此外,還可能包括PCR擴增步驟來增加目標DNA的數量。
4. 測序
目前常用的平臺有Illumina、PacBio和Oxford Nanopore Technologies等。其中,Illumina平臺因其高準確性而廣泛應用于短讀長測序;PacBio和Oxford Nanopore則適用于長讀長測序,有助于解析復雜的基因組結構。
5. 數據處理與分析
質量控制:去除低質量的讀段和接頭序列。
拼接組裝:使用軟件工具將短讀長重新組合成連續的序列(contigs),以便更好地理解微生物基因組。
注釋:識別contigs中的開放閱讀框(ORFs),并預測其功能。
分類學分析:通過比對公共數據庫,確定微生物種類及其相對豐度。
功能分析:探索群落的功能多樣性,比如代謝途徑、抗性基因等。
應用領域
醫學健康:研究人體微生態系統的平衡狀態及其對健康的影響。
農業:了解土壤微生物如何影響作物生長及病蟲害防治。
環境保護:監測水體、土壤污染狀況及其修復過程中的微生物動態變化。
工業應用:發掘新的酶制劑和其他有價值的生物制品。
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