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細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)步驟是什么?e測試平臺和您一起聊聊

更新時間:2024-06-27 點(diǎn)擊次數(shù):0 所屬欄目:公司新聞

  細(xì)胞黏附性是維持組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的基本條件,也是細(xì)胞運(yùn)動和發(fā)揮功能的調(diào)節(jié)因素,并且對細(xì)胞的增殖、分化有重要影響。通常可分為兩類,即細(xì)胞與細(xì)胞黏附和細(xì)胞與基質(zhì)黏附。機(jī)體內(nèi)許多細(xì)胞,如上皮細(xì)胞,需要牢固地定在某處發(fā)揮功能;另一些細(xì)胞,如白細(xì)胞,活躍運(yùn)動,就需要不斷調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附。細(xì)胞黏附性的改變在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中也發(fā)揮著重要作用。體外測定細(xì)胞粘附性實(shí)驗(yàn)方法的建立,為粘附分子的發(fā)現(xiàn)、細(xì)胞間粘附影響的研究提供了極為有效的方法。

  

  細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)步驟

  1. 用無血清培養(yǎng)基RPMI-1640將Matrigel(人工基底膜膠)配制成0.04μg/μl的人工基底膜膠備用,96孔板每孔中鋪Matrigel 2μg,放于超凈臺中風(fēng)干過夜。

  2. 在96孔板加入適量無血清RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液(或PBS或生理鹽水),放置60-90分鐘。

  3. 洗去多余的膠,取培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞以1×104/孔接種在鋪膠的96孔板中,設(shè)3個重復(fù)孔,放入37攝氏度5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。

  4. 加藥和模型藥,培養(yǎng)48h。

  5. MTT檢測:吸掉液體,然后每孔加入MTT 10μL,繼續(xù)培養(yǎng)4h,吸掉液體,每孔加入二甲基亞砜(DMSO)100μl,在振蕩器上振蕩5-10分鐘,在顯微鏡下觀察無晶體,然后在酶標(biāo)儀490nm波長讀取數(shù)值。

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