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“去外泌體血清”指的是經過處理以去除外泌體(exosomes)成分的血清。外泌體是一類由細胞分泌的小囊泡,直徑大約在30-150納米之間,它們含有蛋白質、脂質、RNA(包括miRNA和mRNA)等生物分子,并參與細胞間的通訊。在外泌體研究和某些細胞培養應用中,去除血清中外泌體是很重要的一步,因為外泌體可能干擾實驗結果或影響細胞的行為。
去外泌體血清的制備通常包括以下幾個步驟:
離心處理:
低速離心:首先進行低速離心(例如2000-3000 rpm)以去除血清中的大顆粒,如細胞碎片等。
高速離心:隨后進行高速離心(例如100,000 g以上),這一步是為了去除血清中外泌體。這個過程通常需要較長時間(如數小時或過夜),以確保盡可能多地去除外泌體。
超濾:
使用超濾膜進行過濾也是一個有效的方法。通過選擇合適孔徑大小的濾膜(如0.22 μm或更小),可以去除血清中外泌體。
商品化試劑盒:
市面上也有專門用于去除血清中外泌體的商品化試劑盒。這些試劑盒通常包含特定的試劑和步驟,可以簡化去除過程,并且在一定程度上保證了去除效果的一致性和有效性。
尺寸排阻層析(SEC):
一些實驗室也會使用尺寸排阻層析來去除外泌體,這種方法可以根據分子大小分離血清成分,從而去除外泌體。
免疫沉淀:
通過特異性抗體識別外泌體表面的標志物,如CD63、CD9等,然后進行免疫沉淀,也可以去除外泌體。
在進行去外泌體血清的制備時,需要注意保持無菌條件,以防止污染。此外,去除外泌體的過程中可能會損失一些血清中的營養成分,因此在選擇去除方法時需要權衡利弊。最后,去除外泌體的效果可以通過透射電子顯微鏡(TEM)、納米顆粒追蹤分析(NTA)等方法來驗證。
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