1. 實驗準備

　　樣品制備：準備目標蛋白質和潛在配體(如小分子化合物或生物分子)的溶液。

　　標記：通常需要對其中一個分子(通常是蛋白質)進行熒光標記，以便跟蹤其在溫度梯度中的遷移。

　　濃度系列制備：制備一系列不同濃度的配體溶液，以構建劑量響應曲線。

　　2. 實驗操作

　　溫度梯度建立：將樣品溶液置于MST儀器的特殊試管中，在試管的一端產生溫度梯度。

　　激光照射：使用激光照射樣品溶液，產生溫度梯度。

　　熒光檢測：通過檢測熒光標記分子在溫度梯度中的遷移，記錄熒光強度的變化。

　　3. 數據分析

　　數據收集：收集不同濃度下的熒光強度數據。

　　計算親和力：使用軟件對數據進行擬合，以計算結合常數(Kd值)，這是衡量分子間相互作用強度的一個重要參數。

　　結果解讀：根據Kd值和其他相關參數來評估分子間的結合特性和動力學。

　　應用領域

　　藥物發現：評估小分子藥物候選物與靶標蛋白的結合能力。

　　蛋白質相互作用研究：研究蛋白質與其他蛋白質、核酸或小分子之間的相互作用。

　　抗體篩選：篩選針對特定抗原的高效抗體。

　　表征分子復合體：了解分子復合體的形成和穩定性。

　　注意事項

　　樣品質量：確保使用的蛋白質和配體樣品具有良好的純度和活性。

　　濃度選擇：合理選擇配體的濃度范圍，以確保可以獲得良好的劑量響應曲線。

　　實驗條件：控制實驗條件(如溫度、pH值等)，以保證數據的可靠性和重現性。