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Masson三色染色法是一種經典的組織學染色技術,主要用于顯示組織中的膠原纖維、肌肉纖維和細胞核等結構。在皮膚組織學研究中,Masson染色特別適用于觀察膠原纖維的分布和排列情況,這對于評估皮膚的結構完整性、傷口愈合過程以及皮膚病的研究都非常有用。
下面是進行小鼠皮膚組織的Masson三色染色的一般步驟:
準備工作
組織固定:采集小鼠皮膚樣本后立即放入10%中性甲醛溶液中固定至少24小時。
脫水和透明:固定后的組織經過一系列酒精梯度(70%、80%、90%、100%)進行脫水,然后用二甲苯進行透明處理。
包埋:將透明后的組織塊包埋在石蠟中,制作成石蠟塊。
切片:使用輪轉式切片機將石蠟塊切成4-6微米厚的連續切片,并將其貼附在載玻片上。
Masson三色染色步驟
脫蠟:將切片置于二甲苯中脫蠟3次,每次5分鐘,然后依次通過100%、90%、70%酒精進行再水化。
核固紅染色:將切片置于0.1%核固紅(Weigert's Iron Hematoxylin)染色液中染色10分鐘,然后用水沖洗。
分化:用1%醋酸溶液分化30秒至1分鐘,直到背景變為淡黃色。
Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin染色:將切片置于Biebrich Scarlet-Acid Fuchsin染色液中染色10分鐘,此步驟用于染色肌肉纖維和膠原纖維。
磷鉬酸分化:用1%磷鉬酸溶液分化3-5分鐘,直到背景變得清澈。
Phosphomolybdic Acid染色:將切片置于0.5% Phosphomolybdic Acid溶液中染色10分鐘,這一步驟用于進一步增強膠原纖維的顏色。
Aniline Blue染色:將切片置于1% Aniline Blue溶液中染色5分鐘,用于染色膠原纖維。
脫水和封片:依次通過70%、90%、100%酒精脫水,最后用二甲苯透明,滴加中性樹膠封片。
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