單克隆抗體制備是一個復(fù)雜的過程，涉及多個步驟。以下是單克隆抗體制備的基本步驟概述：

　　抗原提純與動物免疫

　　選擇并純化所需的抗原。

　　使用弗氏完全佐劑(CFA)進行初次免疫，之后使用弗氏不完全佐劑(IFA)進行加強免疫。

　　免疫小鼠(通常為BALB/c小鼠)，監(jiān)測抗體水平。

　　骨髓瘤細胞及飼養(yǎng)細胞的制備

　　選擇合適的骨髓瘤細胞系(如Sp2/0細胞株)，該細胞系應(yīng)不分泌免疫球蛋白。

　　準備處于對數(shù)生長期的骨髓瘤細胞，以確保細胞活性。

　　細胞融合

　　從免疫后的小鼠脾臟中分離B淋巴細胞。

　　使用化學(xué)試劑聚乙二醇(PEG)促進B淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合。

　　篩選出雜交瘤細胞，這些細胞同時具備骨髓瘤細胞的無限增殖能力和B細胞產(chǎn)生抗體的能力。

　　篩選陽性雜交瘤細胞

　　在含有次黃嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶核苷(HAT)的選擇性培養(yǎng)基中培養(yǎng)融合細胞，只有雜交瘤細胞能在這種培養(yǎng)基中存活。

　　通過有限稀釋法將雜交瘤細胞克隆化，確保每個孔中只有一個細胞。

　　使用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測各克隆產(chǎn)生的抗體，并選擇那些產(chǎn)生特異性抗體的克隆進行進一步培養(yǎng)。

　　單克隆抗體的制備

　　對選定的雜交瘤細胞進行大規(guī)模培養(yǎng)，或者將其接種到小鼠腹腔中誘導(dǎo)腹水形成，從中提取抗體。

　　從細胞培養(yǎng)上清或腹水中純化單克隆抗體。

　　抗體的鑒定與表征

　　確定抗體的特異性、親和力和其他特性。

　　對最終產(chǎn)品進行質(zhì)量控制測試。

　　抗體的保存

　　將單克隆抗體凍存以供將來使用。